[导读] 编译整理：强子
免疫组化已经遍布我们日常病理工作的方方面面。不过，众所周知，免疫组化无法解决所有问题，且实际应用中可能存在诸多陷阱。英国诺丁汉大学病理专家Alkhayyat曾在《Histopathology》杂志撰写综述，详尽介绍了p63这一指标的相关知识点，具体如应用于乳腺病理诊断及分类时的要点等，并强调了染色的特异性及敏感性、解读中的陷阱。为帮助大家更好的了解相关信息，我们将该文要点编译介绍如下。
p63简介
p63是位于染色体3q28上的TP63基因编码、p53基因家族的转录因子。该蛋白调节与外胚层及其衍生组织生长、发育相关基因的活性，并通过其复杂的异构体来促进肿瘤发生。正常情况下，p63表达于鳞状上皮、尿路上皮、细胞滋养细胞、多种器官的基底层细胞（也包括乳腺腺上皮系统的肌上皮细胞层）。
病理状态下，p63一般表达于p63阳性正常组织来源的病变，且p63阴性组织来源的病变中一般检测不到，但的确有例外的情况。有报道称，p63阴性组织来源的癌中免疫组化p63阳性可能是异常鳞状分化、或干细胞性质所致，并不一定意味着侵袭性表型。
p63生物学意义
p63也称为TAp63，与p40密切相关，后者也称为δNp63，这两者都是TP63基因产物的异构体。由于外显子跳跃、不成熟转录终止、剪切改变，每一种异构体又有多种变异（α、β、γ、δ、ε）。这两种异构体都有核心的DNA结合结构域、低聚合结构域，p63还有N末端转录活性（TA）结构域，而p40则是另外的终端。
这两种异构体通过独特且不同的分子功能调节细胞信号通路：“全长”的p63可以活化p53靶基因，而转录本较短的p40则抑制p53和“全长”p63活化。p63调节细胞分化、凋亡、肿瘤抑制、肌肉发育，而p40则是干细胞准确发育为腺上皮组织（包括表皮）的关键调节因子，也调节细胞的存活、肿瘤发生、衰老、代谢。p63和p40均表达于鳞状上皮细胞、乳腺基底层的肌上皮细胞，但其表达模式存在差异。
p63免疫组化
抗体相关信息
针对p63和p40，已有多种抗体在多种人体组织中做了验证，具体包括鼠单克隆抗体、兔单克隆抗体、多克隆抗体。详见表1-表3。
表1.针对p63或p40的抗体
表2.抗TP63抗体的相关信息 
表3.抗δNp63（p40）抗体的相关信息
总之，特异性针对p63（TAp63）的抗体与N末端的转录激活结构域结合，而特异性针对p40（δNp63及α、β、γ亚基）的抗体则结合于其他的末端。针对人p63蛋白中核心DNA结合结构域来源合成蛋白的抗体无法区分p63和p40亚基。某些针对p63的抗体可以标记所有六个p63亚基（TAp63α，TAp63β，TAp63γ，δNp63α，δNp63β，δNp63γ）中共同存在的表位。这类所谓的广谱p63抗体最常用于乳腺外科病理实践中，且日常用语中就将其简单的称为p63。
p40与p63的比较
在非小细胞肺癌的鉴别诊断中，已证实作为鳞状细胞癌标记物来说，p40要比p63更为特异。乳腺病理中，p40和p63的比较研究非常有限。有些作者称，在原位癌肌上皮的确定方面，p40的特异性堪比p63，但其着色强度较弱；且也有其他作者证实在标记肌上皮细胞方面，p63比p40更为敏感。有研究指出，日常的乳腺良性增生性病变和恶性病变中，广谱p63抗体和多种p40抗体都是敏感、且特异的肌上皮细胞标记；他们提出广谱p63抗体和p40抗体的表达可以区分化生性癌的亚型，且建议要仔细判读癌细胞中p40的表达，因为其特异性相对较低。
尽管p40（δNp63）是p63的亚基，但一定要注意的是，某些其他的分子也被称为p40，不要和作为肌上皮标记、鳞状上皮标记的p40混淆。这类p40分子具体有：真核起始因子3（eIF3-p40），白介素12/细胞因子p40，溶酶体膜p40，吞噬细胞NADPH氧化酶亚单位p40 phox，肺炎克雷白杆菌toll样受体2配体p40，干酪乳杆菌BL23，支原体p40，酿酒酵母p40/ARPC1。
交叉反应
包括p73在内的p53家族成员来源于同一祖先基因（ancestral gene）并维持其序列一致性（sequence identity），且有共同的组成性结构域。因此，在p63免疫组化方面，针对p53家族成员的抗体交叉反应是一个重要话题。
文献中，识别p63核心共有区域的单克隆抗体发现97%（28/29）存在与p73的交叉反应，部分与p53有交叉反应。p63和p73可单一、或同时表达，且生理学和功能上可能有相互交叉，但其诊断意义似乎是不同的。p63:p63同源二聚体的聚合要强于p63:p73异源二聚体，而后者可能局限于肿瘤，且其中p73分子的比例显著高。因此检测p63的水平、分布、及其与蛋白或DNA的相互作用，可能是有误导的，可能是p73（或p53）相关的事件而已。不过，随着方法学的改进、交叉反应较低的亚基特异性p63抗体的引入，这一问题可能会有所改善。
免疫组化p63在临床实践中的诊断应用简介
1. 作为肌上皮细胞标记，来鉴别乳腺及前列腺中的原位癌和浸润性癌；
2. 证实多种器官中良性及恶性组织的鳞状分化（p63阳性），在多种器官中鉴别鳞状细胞癌和腺癌（p63阴性）；
3. 鉴别皮肤的汗腺癌/附属器癌（p63阳性）和转移至皮肤的腺癌（p63阴性）；
4. 鉴别高级别尿路上皮癌（一般为p63阳性）和高级别前列腺癌、或肾集合管癌（p63阴性）；
5. 用于妊娠滋养细胞疾病的鉴别。
——未完待续——
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参考文献
[1]Alkhayyat R, Abbas A, Quinn CM,et al. Tumour 63 protein (p63) in breast pathology: biology, immunohistochemistry, diagnostic applications, and pitfalls. Histopathology. Published online November 27, 2023.
doi:10.1111/his.15101
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