[导读] 编译整理：强子
墨染标记肿瘤性标本的切缘，已成为临床病理工作中的重要组成部分。切缘有无肿瘤，会决定着患者的下一步治疗方案。常规染色切片无法确定的情况下，可能还需要加做免疫组化辅助判断。但，遗憾的是，某些情况下，免疫组化染色后部分颜色的墨染切缘色泽会有所改变，影响对切缘状态的准确判读。
有鉴于此，澳大利亚皇家阿德雷德医院（Royal Adelaide Hospital）病理专家Chaves Gomes在《Pathology》杂志以通讯的方式，报告了他们对不同颜色标记的乳腺切缘、不同的免疫组化指标、两个不同免疫组化实验室及不同染色平台中这一问题的具体表现。
其实引出这一问题的，是作者实际工作中发现一例浸润性导管癌病例，在蓝染的上切缘有增生的非典型上皮，需行免疫组化检查来鉴别浸润性癌和腺病。免疫组化p63证实肌上皮缺失，支持浸润性癌的诊断。不过，多学科讨论时复阅免疫组化切片，发现受累切缘呈黑色表现；但具体到这一例来说，黑色标记的应该是深部切缘。确定相关情况，对于后续治疗非常关键！密切结合HE染色切片，最终证实所见切缘仍为上切缘，造成相关颜色改变的其实是免疫组化过程中标记切缘的蓝色、颜色改变为了黑色而已。
图1. 文中所述乳腺浸润性导管癌病例，HE切片中蓝色墨水标记的切缘上可见癌细胞（A），但免疫组化AE1/AE3检测对应的切片中，墨水的蓝色变为了黑色。
作者共计分析了17例临床实际工作中包括切缘部分在内的乳腺癌标本，并同时纳入3个混合组织块供质控分析。所用切缘标记的颜色有蓝色、绿色、黑色、橘黄色、红色、黄色，具体商品信息请参阅原文。供质控分析的混合组织块中，每一个均包括三条组织，具体有癌及良性组织。对这3个混合组织块中较长的两条组织、分别用不同颜色标记，这样供质控分析的混合组织块也包括了所有上述六种颜色。
上述组织块按照常规处理、HE染色及免疫组化检查，免疫组化指标有p63、CD45，且免疫组化分别在两家不同实验室进行，各家所用免疫组化检测平台详情请参阅原文。操作过程中，每一步均记录组织切缘的颜色，具体包括切片前、蜡块处理过程中、HE切片中、免疫组化切片中的颜色。
在本文正式分析的20个例子中，作者发现在常规处理及HE染色过程中，墨染切缘仍保持了其原始色泽。但，免疫组化过程中，切缘蓝染的颜色均变为了黑色。这在两家实验室、两个不同检测平台、两种抗体检测中都是如此；但，其余颜色的切缘标记即使在免疫组化后也仍保持了原来色泽。
小结
癌症标本手术切缘组织学评估，是临床诊疗的关键指标。某些情况下的切缘阳性，可能意味着需要进一步手术；根据切缘处病变范围及性质，有时还需加做放射治疗。
不过，具体到乳腺癌切缘评估来说，可能存在诸多困难，具体如取样误差、墨迹污染了非切缘的表面、不同颜色分辨困难（如橘黄及红色的判断）等。本文中所述的、免疫组化后蓝染的颜色变为黑色，也是切缘判断可能遇到的困难之一，且可能会造成重大失误。其实，这种情况下除了颜色改变外，组织中并无其他结构等方面的线索提示病理医师注意，因此如不了解这一现象，可能会对相关切缘代表的具体解剖部位做出误判。
还要注意的是，这种情况在重新送检切缘的标本中更要仔细、慎重，因为重新送检切缘的时候可能会用蓝色和黑色两种墨水来分别标记旧切缘和新切缘。这种情况下，同一标本仅有这两种颜色，想结合其他颜色的标记、结合形状的变化来做出定位判断都几乎不太可能。此时免疫组化后蓝色标记变为黑色，对于病理医师来说可谓是个灾难性的事件！
据本文作者所述，此前文献中对此现象并无详细描述。曾有文献笼统的提及标本脱钙时间延长时，HE切片和免疫组化切片中色泽会有一定改变，也曾观察到蓝色及紫色墨水在免疫组化后会变为黑色。但本文所述病例无一进行脱钙。此外，根据手术记录可以确定，本研究中的标本均在切除后立即置入福尔马林固定液，确保冷缺血时间不超过1小时，完全符合相关国际指南等的要求。
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参考文献
Chaves Gomes D, Farshid G. Change of blue ink margin colour to black in immunohistochemistry stained slides: a potential pitfall for pathology cancer margin assessment. Pathology. 2020;S0031-3025(20)30986-7.
doi:10.1016/j.pathol.2020.08.025
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