[导读] 投稿作者：广西科技大学病理学教研室 任传伟 罗宇
石蜡切片是目前病理科室用做诊断和医学院校病理学教学、科研工作的最主要手段,其质量的优劣，直接影响病理诊断及医学院校病理教学和科研工作的质量。影响切片质量的因素很多，本文结合在实际工作遇到的问题不断总结与改进,摸索出一系列切实可行的经验，现仅就在制做切片制做过程中，一些常见影响切片质量的因素进行分析与探讨并提出改进方法。
1.染色前切片本身质量不佳，主要包括切片破碎不整、厚薄不均、展片不平、皱叠等。
1.1 切片破碎的原因有:组织脱水及浸蜡时间不足或过长，或浸蜡温度过高，造成组织过硬，或浸蜡不足，切片时易破碎;展片时水温过高，蜡膜熔化出现裂隙或断裂；烤片不均致附贴不牢，造成“脱片”;如甲状腺组织含胶质、粘液较丰富的组织脱水后易变硬，变脆等所致。故取材的组织块大小要适宜，厚度一般为2 ～4 mm(活检组织)，脱水、透明等液体应及时更换，每一步时间要合理掌握。浸蜡时间不易过长，一般应控制在1～1.5小时以内，并在第一蜡缸内滴加数滴二甲苯，浸蜡效果更佳，这可能与二甲苯可使石蜡溶解更充分易于浸入组织有关。展片时水温应在41～4 3℃之间,冬季可适当提高温度;烘片时要使温度适宜，使石蜡全部溶化为止。对含胶质成份较多的组织蜡块，切片时可用冰块冷却蜡块数秒钟然后再切，亦可保证切片的完整性。
1.2 切片厚薄不均是指在一张切片上出现厚薄不均的所谓“梯田”现象。主要是由于组织过硬，切片机刀片钝或切片角度过大;切片机本身颤动或蜡块固定不好或切片刀的调整螺旋固定不紧及切片刀刃损伤等因素所致。故在切片前应检查所用器械是否处于良好的工作状态。另外在包埋前骨或含骨性组织应充分脱钙。包埋时还应清除组织内杂物，如线头、碎骨片及其它异物等。
1.3 切片出现皱叠，不平等原因，则是浸蜡时温度过高或时间过长,使组织硬度大于石蜡的硬度;浸蜡不足，展片时水温低，而打不开皱褶,组织碎小，块数较多，致使包埋时不易包在一个水平面上等。故浸蜡时温度一般应高于石蜡溶点2一3℃为宜。对内窥镜取材的胃粘膜、肠粘膜及支气管粘膜等组织最好包平,如组织块数过多可分多个蜡块包埋.
2.染色本身质量方面因素:主要是切片染色对比不清晰，透明度不良，切片内有污染等。
2.1 切片染色对比不清晰的原因主要有两方面，一是苏木素染色太深，分化不良，回色太强。其次是伊红染色过度，掩盖了细胞核，使核内结构模糊，致使核浆对比不清;染色液用之过久或盐酸酒精分化过度亦可使胞核染色不良;脱蜡不净，特别是在室温较低的情况下最易出现。因此，应定期更换染色液，在染色过程中要控制好染色及分化的时间。胞核返蓝要充分，最好用自来水，冬夭可用15℃左右的温水，不用弱碱水，弱碱水虽回返快，但有时易将胞浆染蓝，再染伊红时胞浆变紫，影响观察效果，另外还易脱片。切片脱蜡要彻底，根据季节脱蜡时间可适当延长，在冬季或室温较低时可将二甲苯缸放入温箱中加温,脱蜡效果更佳。
2.2 透明不良的原因主要是切片脱水不彻底，或梯度脱水后在空气中停留时间过长，酒精用之过久，以致浓度不够，特别是无水酒精浓度不够更易使脱水不彻底。因此保证各级酒精的浓度，特别是最后一级酒精的浓度，经验的做法是更换纯酒时使原来的酒精依次下移，这样既节省酒精不致浪费，又能及时更换纯酒保证脱水充分。切片在纯酒精中取出后，应尽快投入二甲苯中进行透明，切不要从纯酒中取出自然干燥后再入二甲苯中透明，这样会导致细胞收缩影响诊断。
2.3 切片的污染问题主要是染液未定期过滤及更换，盖片不洁净，组织块固定时间过长致使福尔马林色素沉淀等。这就要求我们在制作切片前对组织进行充分的冲洗，染液要定期过滤、更替，盖片要清洗洁净，封片时要快，以减少空气中的灰尘污染及气泡产生。
影响石蜡切片质量的高低的因素有很多，因此要求技术操作人员应具有严谨的科学作风和科学态度来对待每一步骤，既要按常规严格操作，又要结合实际工作经验灵活掌握，只有这样，才能制做出优质的病理组织切片应用于教学、医疗和科研。
作者简介：任传伟，女，1979-，广西科技大学病理教研室讲师、广西柳州市肿瘤医院病理科医生，从事临床病理教学及病理科取材工作。
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