不同组织的冰冻切片体会

第三军医大学大坪医院病理科 2017-10-12 2434 评论

作者：毛成毅，杜娟，肖华亮，李增鹏

冰冻切片是将新鲜样品立即在液态氮或其他制冷剂中直接冰冻或者经化学固定后的样品再冰冻，置于低温下迅速冻结达到一定的硬度后直接进行切片的一种方法。目前，冰冻切片主要用于临床病理快速诊断和部分形态学研究性工作中。

了解冰冻切片的原理可以更好地运用在临床病理取材中，也便于在临床教学中更好地学习与实践。本文就冰冻切片的原理和其优缺点进行简单的阐述。

冰冻切片的原理

组织经过冷冻后，其内的水分结冰，起到了包埋剂的作用，使组织变硬，有利于切成薄片。其过程比较简单，无需经过脱水和透明步骤，组织经固定或不固定都可切片，一般亦可切成几微米的薄片。由于组织不经溶剂处理，不受试剂的强烈刺激及温度的影响，所以组织没有显著的收缩，细胞形态没有大的改变，脂肪和类脂也能较好保存。这样，冰冻切片除了对外科手术中的快速诊断十分有意义外，在组织化学、免疫组织化学、免疫定位、原位杂交、酶定位及植物微管研究中也被广泛地应用。

和其他几种切片方法相比，冰冻切片有着独特的优越性，但也有一定的局限性。

1.优点

1)简便，快速，用时短。在临床上，手术的摘出物需急速诊断时，用此法从采取标本到切片制成，可以在15min之内完成。切片前可以不需要对组织固定、脱水、透明、包埋等手续即可进行切片，减少了一些中间环节。

2)组织变化不大。能较好地保存脂肪、类脂等成分；在免疫组织化学研究中有利于组织抗原性的保存；有些研究为了保存某些酶的活性也需要采用此法。特别是对于那些对有机溶剂或热的温度耐受能力较差的细胞膜表面抗原和水解酶保存较好。

2.缺点

1)不容易做连续切片和较薄的切片。

2)组织块在冻结过程中产生的冰晶影响细胞的形态结构及抗原物质的定位。组织结构不如石蜡切片好，切片较厚、不易得到很好的连续切片，且操作时容易破碎(易破碎的样品在冰冻前可用10％明胶或2％琼脂糖包埋)。由于组织内的水份起到包埋剂的作用，在组织冰冻的过程中，一旦冰晶的核心形成，它们就逐渐膨胀，并破坏所有围绕它们的细胞器。当冰冻的组织切片贴到玻片上时，冰晶融化，在组织上留下许多孔状的空隙。由于水在-4℃时体积最大，组织内形成冰晶的数量则与组织冷冻的速度成反比，因此，要尽量避免缓慢的冷却。使组织的温度迅速降到-4℃以下，而且送检做冰冻切片的组织应尽可能地新鲜和避免过度的潮湿。用湿的盐水纱布包裹组织会使切片出现严重的人为假像及大量的冰晶孔隙，不仅造成诊断的困难，也使各种特殊要求的染色难以进行。

在临床实践中，结合需要，选择合适的切片方法，提高诊断的准确性显得尤为重要。