[导读] 编译整理：强子
众所周知，随着应用的普及，诸多曾被认为有特异性的免疫组化指标会逐渐变得不那么“特异”。这其中部分是由于抗体与其他组织或抗原发生交叉反应（cross-reaction）所致。近期有文章称，免疫组化TdT阳性可见于生殖细胞来源肿瘤，但意大利米兰第二大学（University Milan Bicocca）专家Jaconi等人对此进行详尽研究后，发现这一现象可能是交叉反应所致。该研究已撰写成文发表于《Journal of Clinical Pathology》杂志，为帮助大家更好的了解该现象，我们将该文编译介绍如下。
研究内容
作者对22例包括精原细胞瘤及非精原细胞瘤在内的病例进行免疫组化TdT检测；具体肿瘤部位涉及睾丸、卵巢、纵膈原发灶及淋巴结转移灶，具体病理类型方面有单纯性精原细胞瘤（16例）、混合性生殖细胞肿瘤（4例，其中有3例伴精原细胞瘤成分）、无性细胞瘤（1例）、成熟型畸胎瘤（1例）。
由包括泌尿病理专家或淋巴造血病理专家在内的专家组按照世界卫生组织相关意见进行形态学和免疫组化评估。所用一抗为Dako公司的单克隆兔抗EP266、或Ventana公司的多克隆鼠抗，染色过程分别为Dako公司的自动免疫组化平台Dako Omnis或Ventana公司的Ventana Benchmark。抗原修复方法及抗体浓度方面信息详见原文。
有8个病例（7例精原细胞瘤、1例混合性生殖细胞肿瘤）进行了两种抗体的检测，6例（4例精原细胞瘤、1例成熟型畸胎瘤、1例无性细胞瘤）仅进行了前述单克隆抗体的检测，8例（5例精原细胞瘤、3例混合性生殖细胞肿瘤）仅进行了前述多克隆抗体的检测。具体判读中，只有肿瘤细胞的细胞核明确着色才判定为阳性，在此基础上再将阳性病例分为轻度、局灶阳性和中度、弥漫阳性两组。
图1. 免疫组化结果示例：精原细胞瘤中TdT免疫组化结果，（A）为多克隆抗体，阳性表现为细胞核不连续的弱阳性着色；（B）为单克隆抗体，阳性表现为细胞膜弥漫、强阳性着色。
在此基础上，作者对睾丸及精原细胞瘤的福尔马林固定、石蜡包埋组织和新鲜冰冻标本进行了Western Blot检测，同时设有阳性对照，即淋巴母细胞淋巴瘤的福尔马林固定、石蜡包埋标本和含有70%急性淋巴细胞白血病细胞的新鲜骨髓穿刺标本。总计检测标本例数10例。同时利用Western Blot检测标本及数据进行了质谱分析，并在相关生物信息数据库中进行了检索、比对。
研究结果
30份免疫组化检测中，阳性与阴性之比为19:11。单克隆抗体检测中的阳性比例为13/14（中等程度着色）；17例通过多克隆检测的生殖细胞肿瘤有6例出现轻度、局灶阳性。混合性生殖细胞肿瘤中，阳性结果主要见于精原细胞瘤成分。同时进行了单克隆抗体、多克隆抗体检测的8例标本中，所有病例均为阳性。单克隆抗体的阳性为中等程度着色，多克隆抗体的阳性则为轻度着色。
对于阳性病例来说，不管组织学切片中生殖细胞肿瘤与原位成分之间的比例如何，均会有至少局灶的阳性着色。正常睾丸结构如曲细精管、睾丸网等则为阴性。
福尔马林固定、石蜡包埋组织Western Blot检测，证实淋巴母细胞性淋巴瘤中对应分子量约为58kDa处蛋白条带，符合TdT蛋白的分子量；将其作为内对照，正常睾丸的福尔马林固定、石蜡包埋组织并未检出相应条带。精原细胞瘤的福尔马林固定、石蜡包埋组织进行检测，应用多克隆抗体时，并未检出相应条带；应用单克隆抗体的时候虽有疑似条带，但其分子量仅稍高于50kDa，而对应TdT蛋白区域未见条带检出。新鲜组织进行的Western Blot检测结果更为明确：精原细胞瘤组织中存在45-50kDa的蛋白、会与单克隆的TdT抗体相互作用，而多克隆的TdT抗体并未产生特异性信号。对45-50kDa处条带进行，质谱分析也证实并无TdT相关的肽类。
考虑到上述结果有无可能是TdT截断、导致了更低分子量蛋白质的产生，但却仍可能保留了与相关抗体结合的特性。因此在前述工作基础上，对相关生物信息数据库进行检索、比对，结果发现人polMu蛋白的不同异构体、以及另一个和polMu高度相似的蛋白，均与TdT的氨基酸序列具有36.4%的相似性；而相关数据库查询结果表明，生殖细胞肿瘤中并无上述蛋白。
小结
本文研究结果表明，生殖细胞肿瘤免疫组化表达TdT的几率约为80%，大多见于单纯性精原细胞瘤、或混合性生殖细胞肿瘤中的精原细胞瘤成分。这一现象在生殖腺外的肿瘤、以及淋巴结转移灶内也是如此。
虽然有上述阳性结果，但本文通过Western Blot检测、质谱分析等进行了深入研究，并结合相关生物学信息库检索，证实生殖细胞肿瘤免疫组化TdT阳性可能是交叉反应所致。这一研究思路及相应研究方案，值得我们临床病理医师学习。
对于生殖细胞肿瘤的诊断来说，主要是根据形态学表现、并辅以一组免疫组化指标。免疫组化指标的选择需建立在形态学评估的基础上。一般选择PLAP、CD117、OCT3/4即可满足需要。根据本文研究结果，如未对形态学进行详尽评估而盲目加做TdT，可能会造成诊断困难，尤其如淋巴结性病变判定原发灶、或性腺外小活检标本等情况下。其次，由于生殖细胞肿瘤表达TdT这一现象还未得到充分认识，因此如果在与其他肿瘤鉴别、尤其和发生于性腺的造血系统肿瘤鉴别时，可能会导致判定困难。转移性病变鉴别中，如果免疫组化套餐包括了TdT，则最好同时加一组生殖细胞肿瘤相关标记，以防误判。
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参考文献
Jaconi M,Magni F,Raimondo F,et al.TdT expression in germ cell tumours: a possible immunohistochemical cross-reaction and diagnostic pitfall[J].Journal of clinical pathology,2019,72(8):536-541.
DOI:10.1136/jclinpath-2019-205713
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