免疫组化双染最初用于乳腺癌及前列腺癌检测，目前已广泛用于细胞学标本，如对非小细胞肺癌进一步分类、宫颈刷片检测、各种积液检测等：该方法同时检测一项细胞核指标以及一项细胞浆指标，可以在反应性背景中清晰的显示出少量肿瘤细胞。

表1. 细胞学标本中免疫组化双染实例

临床工作中，分化较差的上皮源性肿瘤鉴别相对困难。但从临床治疗角度出发，及时、准确的鉴别恶性黑色素瘤、癌、以及某些具有上皮样形态的肉瘤意义重大，因此实际工作中常需一组免疫组化指标进行鉴别诊断。随着新辅助治疗以及靶向药物等方面的进展，细针穿刺活检以及小活检标本越来越多，有时因组织较少等，无法满足进行一组免疫组化指标检测的要求。

有鉴于此，哈佛医学院附属布莱根妇女医院病理科Mito等考虑广谱角蛋白（AE1/AE3）、SOX10免疫组化双染可能有助于快速鉴别来源不明的低分化上皮样恶性肿瘤：SOX10是一种神经外胚层标记，Schwann细胞、部分肌上皮细胞、黑色素细胞中均有表达，如良性神经鞘瘤、恶性外周神经鞘膜瘤（表达程度不一）、恶性黑色素瘤、基底样型乳腺癌、部分涎腺肿瘤；且用于鉴别转移性恶性黑色素瘤时，SOX10的敏感性要由于S100。

该研究中具体病例情况见表2。

表2. SOX10-AE1/AE3免疫组化双染结果

备注：其中一例在细针穿刺细胞块中既有恶性黑色素瘤、又有癌的成分，因此为便于分析，记为了癌及转移性恶性黑色素瘤各一例。

由表2可知，所有的转移性恶性黑色素瘤均不表达AE1/AE3，而大部分均为细胞核弥漫性表达SOX10（32/34，95%）（图1）；大部分上皮样及多形性肉瘤均不表达SOX10和AE1/AE3（26/31，84%）（图2A-B），其中包括了上皮样血管肉瘤、上皮样胃肠道间质瘤、未分类多形性肉瘤；仅有一例上皮样胃肠道间质瘤仅呈现SOX10在细胞核无特异性的弱阳性表达。不过，也有些具有类型特异性的表达模式，如两例透明细胞肉瘤（图2C-D）、两例上皮样恶性外周神经鞘膜瘤均为SOX10细胞核阳性；两例近端型上皮样肉瘤中有一例出现了仅胞质内多灶性表达AE1/AE3。

图1.转移性恶性黑色素瘤（A），细胞核表达SOX10（B），而细胞质不表达AE1/AE3（B）；有时转移性恶性黑色素瘤可出现类似鳞状细胞表现（C），且SOX10细胞核阳性程度不一（D）。

图2.肉瘤中SOX10-AE1/AE3的表达：未分化多形性肉瘤中SOX10及AE1/AE3均不表达（A、B）；上皮细胞为主、混杂有梭形细胞的透明细胞肉瘤中仅有SOX10在细胞核呈弥漫阳性。

癌中最常见的染色模式则为仅有胞质表达AE1/AE3（32/42，76%），不同类型的癌其着色强度不一（图3A-B）；第二种染色模式则为SOX10及AE1/AE3均不表达（7/42，17%）（图3C-D），但可以局灶表达其他角蛋白。还有一小部分癌SOX10及AE1/AE3均表达（3/42，7%）：其中一例为乳腺三阴型浸润性导管癌转移而来（图4A-B）。为进一步确定SOX10-角蛋白免疫组化双染在三阴型乳腺癌中的作用，作者进一步加入了转移性三阴型乳腺癌粗针穿刺活检标本10例、细针穿刺细胞块标本5例进行了分析，结果表明有7例（7/16，44%，其中2例为细胞块标本，5例为粗针穿刺活检标本）出现了细胞核SOX10、细胞质AE1/AE3的共同表达（图4）。

图3.大部分癌均为仅表达AE1/AE3：转移性低分化食管癌中有核仁显著的上皮样细胞（A），免疫组化双染为AE1/AE3细胞质强阳性（B）；而某些癌、如低分化尿路上皮癌（C）则SOX10及AE1/AE3均不表达（D）。插图为CK7。

图4.转移性三阴型乳腺浸润性导管癌会出现SOX10-AE1/AE3的双表达：A、B为细胞块，C、D为粗针穿刺活检。

有一例肝脏细针穿刺标本中出现了两种染色模式：一种为最常见的SOX10阳性、AE1/AE3阴性，另一种为AE1/AE3阳性、SOX10阴性。细针穿刺标本中可见两种细胞类型：一种为较大、粘附性强的上皮样细胞，胞核深染、不规则，染色质粗糙，形成实性团块状（图5A）；一种为粘附性差、松散的上皮样细胞，细胞核偏位，偶见较大的多个核仁（图5B）。免疫组化双染时，粘附性差的细胞仅表达SOX10（图5C），且这些细胞同时表达MART-1、HMB-45；而形成腺样结构、粘附性强的细胞仅表达AE1/AE3（图5D），且这些细胞也表达PAX-8；加之该患者具有恶性黑色素瘤、高级别浆液性癌病史，因此诊断为转移性恶性黑色素瘤、转移性高级别浆液性癌同时累及肝脏。

图5.肝脏细针穿刺标本，碰撞癌，SOX10-AE1/AE3均有表达：图A为粘附性好的高级别上皮样细胞，细胞核不规则，深染，染色质粗糙，图B为粘附性差的上皮样细胞，胞核居中，可见双核，偶见大核仁，图C为细胞块中可见两种形态不同的细胞混在一起。高级别浆液性癌的成分仅表达AE1/AE3（红色），而恶性黑色素瘤细胞则仅表达SOX10（棕色）；插图为癌中可见PAX8表达、恶性黑色素瘤中可见HMB-45表达。

总之，该文提出了细针穿刺标本中SOX10-角蛋白免疫组化双染中可出现四种染色模式：仅有细胞核表达SOX10，如转移性恶性黑色素瘤、透明细胞肉瘤、上皮样恶性外周神经鞘膜瘤；SOX10及AE1/AE3均不表达，如肉瘤、AE1/AE3阴性的癌、大细胞淋巴瘤、浆细胞肿瘤；仅有细胞质表达AE1/AE3，如大部分癌、间皮瘤、上皮样肉瘤、上皮样脉管肿瘤；细胞核表达SOX10、细胞质表达AE1/AE3的双阳性表达，如三阴型乳腺癌、涎腺肿瘤、肌上皮来源的软组织肿瘤。经过这一简单的免疫组化双染分类后，再进一步做其他免疫组化指标证实即可。这一方案既能节约时间，又可以节约标本，值得临床进一步推广、总结。

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参考文献

Mito JK,Conner JR,Hornick JL,et al.SOX10/keratin dual-color immunohistochemistry: An effective first-line test for the workup of epithelioid malignant neoplasms in FNA and small biopsy specimens[J].Cancer cytopathology,2018.